خدمت میکروسکوپ نوری - فلورسانس
آزمایشگاه میکروسکوپ نوری - فلورسانس
درباره خدمت:
آزمایشگاه میکروسکوپ نوری - فلورسانس پژوهشگاه ابن سینا مجهز به دو میکروسکوپ نوری-فلورسانس مستقیم (upright) و معکوس (invert) می باشد و محققین و دانشجویان را برای مشاهده و عکسبرداری از نمونه های سلولی و بافتی که بر بسترهای متداول اسلاید یا ظروف کشت قرار گرفته اند، یاری می رساند.
از آنجاییکه نمونه های سلولی و بافتی به جهت شفاف بودن، کنتراست زیادی ندارند بنابراین تصویر مشاهده شده جزییات قابل افتراق و قابل استنادی را نشان نمی دهند، لذا شیوه های متنوع رنگ آمیزی اجزا سلول یا بافت برای ایجاد کنتراست و نمایش جزییات نمونه، طراحی و توسعه یافته اند. در ضمن باید توجه داشت که نوع پروتکل رنگ آمیزی سلول یا بافت تعیین کننده استفاده از حالت نوری یا فلورسانس میکروسکوپ می باشد. بدین ترتیب برای مشاهده و عکسبرداری نمونه هایی که با روشهای شیمیایی-کروموژن (روشهای سایتوشیمی و هیستوشیمی) رنگ آمیزی می شوند با بخش نوری این میکروسکوپ ها قابل عکسبرداری خواهند بود. نمونه هایی که با استفاده از فلوروکروم ها و طبق پروتکل های ایمنوفلورسانس رنگ آمیزی شده اند، برای مشاهده و عکسبرداری نیازمند امکانات بخش فلورسانس میکروسکوپ می باشند.
1- میکروسکوپ مستقیم (upright) نوری و فلورسانس Olympus-BX51 مجهز به دوربین بسیار حساس DP71 می باشد.
لازم به یادآوری است که جهت مشاهده با میکروسکوپ upright، نمونه ها بایستی بر روی اسلاید شیشه ای تهیه شده باشد.
- در مورد نمونه هایی که به روش شیمیایی رنگ شده و با چسب ®Entellan مانت شده باشند با حالت نوری میکروسکوپ قابل مشاهده و عکسبرداری هستند و لام ها مراقبت های ویژه نمونه های فلورسانس را نیاز ندارند.
- در مورد نمونه های فلورسانس که بر روی اسلاید شیشه ای تهیه شده اند، معمولا از مانتینگ PBS-Glycerol 50/50 استفاده کرده و برای پرهیز از خشک شدن اسلایدها درون جعبه های پلاستیکی غیر قابل نفوذ نور، با کمی آب در کف آن جهت تامین رطوبت و نگهداری در سرمای بین 4 الی 8 درجه سانتیگراد، که در بهترین شرایط تا یک هفته قابل نگهداری خواهند بود.
در ضمن در مورد بخش فلورسانس میکروسکوپ به اطلاع می رساند که نور تولید شده توسط لامپ جیوه میکروسکوپ با استفاده از فیلترهایی در محدوده میانگین طول موجهای 366، 477، 546 و 579 نانومتر، می تواند طول موج های ذکر شده را برای تهییج (excitation) فلوروکرومهای مورد نظر فراهم نماید.در جدول زیر نمونه فلوروکروم های قابل تهییج را در مقایسه با فیلترهای اختصاصی مورد نظر مشاهده می کنید.عدسی های این میکروسکوپ با بزرگنمایی های ×4، ×10، ×20، ×40 و ×100 قابل استفاده می باشند.
2- میکروسکوپ معکوس (invert) نوری و فلورسانس Olympus- CKX41 مجهز به دوربین بسیار حساس DP71
نمونه های سلولی در داخل پلیت یا فلاسک کشت سلولی قابل مشاهده و عکسبرداری در دو بخش نوری و فلورسانس خواهند بود. عدسی های این میکروسکوپ با سه بزرگنمایی ×4، ×10 و ×40 قابل استفاده می باشند. در ضمن این میکروسکوپ مجهز به دو فیلتر در طول موجهای با میانگین 477 و 546 نانومتر برای تهییج (excitation) فلوروکرومهای مورد نظر می باشد.
این آزمایشگاه دارای سابقه طولانی و موفق در عکسبرداری از نمونه های سلولی جانوری، گیاهی و نمونه های سنتتیک شفاف برای حداکثر قدرت تفکیک 500 نانومتر می باشد.
در ادامه عکس های مختلفی که جهت پروژه های گوناگون تهیه شده، قرارداده شده است.
1- عکس های تهیه شده به کمک میکروسکوپ مستقیم (upright) Olympus-BX51
- اسلاید تهیه شده به روش سایتواسپین، رنگ آمیزی شده با دو رنگ FITC و DAPIو دو فیلتر 495-460 نانومتر و 385-330 نانومتر(FITC به سطح غشا وDAPI به هسته متصل شده است)
- اسلاید تهیه شده به روش سایتواسپین، رنگ آمیزی شده با دو رنگ FITC و DAPIو دو فیلتر 495-460 نانومتر و 385-330 نانومتر (FITC به سطح غشا و سیتوپلاسم وDAPI به هسته متصل شده است)
- اسلاید تهیه شده به روش سایتواسپین، رنگ آمیزی شده با دو رنگ FITC و 7AADو فیلتر 495-460 نانومتر
- اسلاید تهیه شده به روش کشت مستقیم سلول بر روی اسلاید، رنگ آمیزی شده با سه رنگ FITC، RFP و DAPI به کمک سه فیلتر 495-460 نانومتر، فیلتر 550-530 نانومتر و 385-330 نانومتر
- اسلاید تهیه شده به روش برش از بافت قالبگیری شده در پارافین، رنگ آمیزی شده با سه رنگ Alexa 488، Alexa 594 و DAPI به کمک سه فیلتر 495-460 نانومتر، فیلتر 580-545 نانومتر و 385-330 نانومتر
- تست comet assay جهت بررسی آسیب DNA
- اسلاید تهیه شده به روش سایتواسپین، جهت مشاهده هسته های آپوپتوتیک، رنگ آمیزی شده با hoechst 33342 به کمک فیلتر 385-330 نانومتر
- اسلاید سوسپانسیون سلولی القا شده برای آپوپتوز، رنگ آمیزی شده با Annexin کونژوگه با FITC و پروپیدیوم یداید (PI)
- رنگ آمیزی باکتری به کمک آنتی بادی کونژوگه با FITC
- نانوفایبر کونژوگه شده با فلوروکروم سبز
- نانوفایبر کونژوگه شده با فلوروکروم قرمز
- رنگ آمیزی ایمنوهیستوشیمی بافت، DAB Chromogen) و (Hematoxylin
- رنگ آمیزی ایمنوهیستوشیمی بافت، DAB Chromogen)، Fast Red Chromogen و Hematoxylin)
2- عکس های تهیه شده به کمک میکروسکوپ معکوس (invert) Olympus-CKX41
مشخصات مسئول فنی و کارشناس مسوول و اطلاعات تماس:
- مسئول آزمایشگاه: دکتر ابراهیم میرزادگان، دکتری مهندسی بافت PhD
- کارشناس آزمایشگاه: ژامک پهلوان زاده، کارشناسی ارشد رشته زیست شناسی سلولی و مولکولی
شماره تماس : 02122432020 - داخلی 205
آزمایشگاه مرکزی فلوسیتومتری در طبقه اول پژوهشگاه ابن سینا واقع در دانشگاه شهید بهشتی قرار دارد.
تقویم کاری شنبه تا چهارشنبه ساعت 16-8
خط مشی تست یا خدمت با تعیین هزینه ها: با توجه به نوع نمونه و شرایط آزمون درخواستی متغیر خواهد بود.
لذا در پاسخ به اولین تماس متقاضی هزینه انجام آزمون اعلام می گردد.
*حداقل 48 ساعت قبل از ارسال نمونه با کارشناس آزمایشگاه هماهنگی صورت پذیرد
خط مشی تست یا خدمت با تعیین هزینه ها: با توجه به نوع نمونه و شرایط آزمون درخواستی متغیر خواهد بود.
لذا در پاسخ به اولین تماس متقاضی هزینه انجام آزمون اعلام می گردد.
*حداقل 48 ساعت قبل از ارسال نمونه با کارشناس آزمایشگاه هماهنگی صورت پذیرد